Responsable : 
Aashiq Kachroo

Établissement : 
Université Concordia

Année de concours : 
2020-2021

Table des matières

  1. Résumé du projet

1. Résumé du projet

Cette subvention propose de remplacer les gènes humains non humanisables et de créer des voies / complexes humanisés d’ordre supérieur dans une seule souche de levure. Les souches résultantes serviront de nouveaux réactifs physiques pour étudier les gènes humains dans un contexte d’organisme simplifié. Cette trousse à outils de levure humanisée ouvrira la voie à de simples tests à haut débit de la fonction des gènes humains, en mesurant l’impact de la variation génétique humaine sur la fonction des gènes, le criblage et la réaffectation des médicaments, ainsi que la détermination rapide des mécanismes de résistance et de spécificité des médicaments.

En gros, les objectifs que nous proposons ont deux objectifs principaux. L’objectif 1 se concentre sur « fabriquer » de la levure humanisée, alors que l’objectif 2 sur « Appliquer ». Dans l’objectif 1, nous proposons d’humaniser l’utilisation de CRISPR-Cas9 pour générer des souches de levure humanisées avec des gènes humains remplaçant leurs loci de levure natifs en tant que gènes uniques et en tant que systèmes complets. Nous nous concentrons également sur les gènes humains non remplaçables et développons des méthodes pour isoler les variants permettant la permutation. Dans l’objectif 2, nous proposons de personnaliser les souches humanisées afin de mesurer l’impact de la variation génétique humaine. L’idée clé est que les variants génétiques ayant des conséquences fonctionnelles montreront des différences phénotypiques chez la levure humanisée, telles qu’une diminution de l’aptitude à la perte de fonction. Nous allons introduire un paradigme pour déterminer les effets de la variation génétique sur la fonction du gène humain : en humanisant la levure avec des variants de gène et en séquençant NextGen pour déconvoluer le taux de croissance relatif de chaque souche, nous pouvons ensuite évaluer le taux de croissance de la levure de chaque variante en tant que lecture de l’impact fonctionnel de la variation du gène humain (utilisant le complexe protéasome et la voie de la biosynthèse du cholestérol comme modèles).